Bestimmung von Nitrosaminverunreinigungen in Propranololhydrochlorid-Tabletten durch Flüssigchromatographie

Keywords: Propranolol, Hochleistungsflüssigkeitschromatographie, Nitrosamin-Verunreinigungen

1. Instrumente und Reagenzien​

1.1 Konfigurationsliste des HPLC-Systems

1.2 Reagenzien und Standardlösungen

Tabelle 2 Reagenzien und Standardlösungen

1.3 Experimentelle Materialien und Hilfsausrüstung

Ultraschallreiniger

Vortex-Mischer

2. Experimentelle Methode

2.1 Lösungszubereitung

2.1.1 2mol/L Natriumhydroxid-Lösung: 4g Natriumhydroxid abwiegen, in 50 ml Wasser auflösen und gut mischen.

2.1.2 Acetonitril-Wasser-Schwefelsäure (55:45:0,1) Gemisch: 1,6 g Natriumdodecylsulfat und 0,31 g Tetrabutylammoniumdihydrogenphosphat abwiegen, 1 ml Schwefelsäure, 450 ml Wasser und 550 ml Acetonitril zugeben. Mit 2 mol/L Natriumhydroxid-Lösung auf pH 3,3 einstellen und gut mischen.

2.1.3 Lösungsmittel: Wie mobile Phase.

2.1.4 Lineare Lösung: Eine geeignete Menge N-Nitroso-propranolol-Referenzstandard genau abwiegen, in mobiler Phase auflösen und verdünnen, um eine Lösung mit etwa 200 ng pro 1 ml als Standard-Stammlösung zu erhalten. Anschließend geeignete Volumina der Stammlösung genau in sechs 100 ml Messkolben überführen, bis zur Marke mit mobiler Phase verdünnen und gut mischen, um eine Standardreihe von Arbeitskurven mit Konzentrationen von 0,8 ng/ml, 1 ng/ml, 2 ng/ml, 3 ng/ml, 4 ng/ml und 6 ng/ml herzustellen.

2.1.5 Referenzstandardlösung: Eine geeignete Menge N-Nitroso-propranolol-Referenzstandard genau abwiegen, in mobiler Phase auflösen und verdünnen, um eine Lösung mit etwa 2 ng N-Nitroso-propranolol pro 1 ml als Referenzstandardlösung herzustellen.

2.2 Probenvorbereitung

2.2.1 Probenlösung: Eine geeignete Menge fein gemahlener Propranololhydrochlorid-Tabletten genau abwiegen, in mobiler Phase auflösen und verdünnen, um eine Lösung mit etwa 0,27 mg Propranolol pro 1 ml als Probenlösung herzustellen.

2.2.2 Genauigkeitslösung: Etwa 297 mg fein gemahlene Propranololhydrochlorid-Tabletten genau in einen 100 ml Messkolben einwiegen. Eine geeignete Menge N-Nitroso-propranolol-Referenzstandardlösung zugeben, auflösen und bis zur Marke mit mobiler Phase verdünnen, um eine 100%ige angereicherte Probe herzustellen. Gut mischen, um die Genauigkeitslösung zu erhalten.

3. Experimentelles Ergebnis

3.1 Spezifität

Abb. 2 Chromatogramm der Spezifität

Hinweis: Das Lösungsmittel stört die Detektion von N-Nitroso-propranolol nicht, und die chromatographischen Peaks anderer Verunreinigungen in der Testlösung stören auch nicht die Bestimmung der N-Nitroso-propranolol-Verunreinigung.

3.2 Linearitätstest

Abb. 3 Standardkurve der N-Nitroso-propranolol-Verunreinigung

Hinweis: Die experimentellen Ergebnisse zeigen, dass der Korrelationskoeffizient (R) der Testkurve für die N-Nitroso-propranolol-Verunreinigung 0,999 übersteigt und die Anforderungen des Tests erfüllt.

3.3 Wiederholungstest

Abb. 4 Chromatogramme von sechs Replikatinjektionen für 2 ng/ml Standard

Tabelle 3 Daten von sechs Replikatinjektionen für 2 ng/ml Standard

Hinweis: Wie in der obigen Tabelle gezeigt, beträgt die Wiederholbarkeit der Retentionszeit von N-Nitroso-propranolol 0,043 % und die Wiederholbarkeit der Peakfläche 0,464 %, was auf eine gute Wiederholbarkeit hindeutet.

3.4 Genauigkeitstest

Abb. 5 Überlagerte Genauigkeitschromatogramme von N-Nitroso-propranolol in Tabletten

Tabelle 4 Genauigkeit von Propranololhydrochlorid-Tabletten (N-Nitroso-propranolol)

Hinweis: Die Wiederfindung von N-Nitroso-propranolol in sechs Proben lag zwischen 96,98 % und 104,71 %, mit einer durchschnittlichen Wiederfindung von 101,38 %. Die Methode zeigt eine gute Genauigkeit und Wiederholbarkeit.

3.5 LOD-Test

Abb. 6 Testchromatogramm von N-Nitroso-propranolol bei 2 ng/ml Standardkonzentration

Tabelle 5 Referenztestdaten von N-Nitroso-propranolol bei 2 ng/ml Standardkonzentration

Hinweis: Basierend auf den Testdaten für den N-Nitroso-propranolol-Referenzstandard bei einer Konzentration von 2 ng/ml in der obigen Tabelle wird die theoretische Nachweisgrenze für N-Nitroso-propranolol mit einem Signal-Rausch-Verhältnis von 3:1 als Nachweisgrenzenkriterium auf 0,151 ng/ml berechnet.

3.6 Test einer Marken-Tablette

Abb. 7 Testchromatogramm einer Marken-Tablette

Hinweis: N-Nitroso-propranolol wurde in den Marken-Tabletten nicht nachgewiesen.

4. Schlussfolgerung

Eine Studie über die Nitrosamin-Verunreinigung N-Nitroso-propranolol in Propranololhydrochlorid-Tabletten wurde in Übereinstimmung mit dem kürzlich veröffentlichten Leitfaden der FDA zur Festlegung akzeptabler Aufnahmemengen für Nitrosamin-Arzneimittel-bezogene Verunreinigungen (NDSRI) durchgeführt. Gemäß diesem Dokument wird der AI-Wert (Acceptable Intake) auf 1500 ng/Tag berechnet. Unter Berücksichtigung der maximalen Tagesdosis dieses Produkts (200 mg) darf die Kontrollgrenze in Tabletten 7,5 ppm nicht überschreiten. Die Methodenvalidierung wurde unter Verwendung der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC)-Serie von Wayeal mit einem UV-Detektor durchgeführt. Tablettenproben wurden mit der validierten Nachweismethode analysiert, und es wurde keine Nitrosamin-Verunreinigung N-Nitroso-propranolol nachgewiesen. Alle oben genannten Daten entsprechen den pharmakopöischen Anforderungen an die Instrumentierung.