Bestimmung von sieben Parabenen in Lebensmitteln durch Flüssigchromatographie

Parabene (p-Hydroxybenzoate) sind als eine Klasse hochwirksamer und breitbandiger Konservierungsmittel weit verbreitet in den Bereichen Lebensmittel (wie Sojasauce, Essig, Getränke, Marmelade usw.), Kosmetika und Pharmazeutika. Ihre antibakterielle Wirksamkeit und Sicherheit wirken sich direkt auf die Produktstabilität und die Gesundheit der Verbraucher aus. Dieses Experiment bezieht sich auf den "GB 5009.31-2025 Nationaler Lebensmittelsicherheitsstandard — Bestimmung von Parabenen in Lebensmitteln" unter Verwendung des Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographiesystems der Wayeal LC3500-Serie, ausgestattet mit einem DAD-Detektor zur Analyse.

Schlüsselwörter: Lebensmittelzusatzstoffe; Parabene; p-Hydroxybenzoate; Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie.

1. Geräte und Reagenzien

1.1 Konfigurationsliste der Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographie

Tabelle 1 Tabellenliste der Gerätekonfiguration

1.2 Reagenzien und Standards

Tabelle 2 Tabellenliste der Reagenzien und Standards

1.3 Experimentelles Material und Hilfsausrüstung

Analysenwaage

Ultraschallreiniger

Vortex-Mischer

2. Experimentelle Methode

2.1 Reagenzienvorbereitung

2.1.1 Gemischte Standard-Arbeitslösung von Parabenverbindungen: Pipettieren Sie die gemischten Standards von Parabenverbindungen in geeigneter Weise und verdünnen Sie sie mit 30 % Methanol-Wasser, um gemischte Standard-Arbeitslösungen mit Massenkonzentrationen von 0,2 mg/L, 0,5 mg/L, 1,0 mg/L, 2,0 mg/L, 5,0 mg/L, 10 mg/L, 20 mg/L und 50 mg/L herzustellen.

2.1.2 Probenvorbehandlung:

Wiegen Sie 5 g (genau bis 0,01 g) der Probe in ein 50-ml-Graduiertenzentrifugenröhrchen (kohlensäurehaltige Getränke erfordern vor dem Wiegen eine Ultraschallentgasung in einem Ultraschallreiniger für 10 Minuten). Geben Sie 30 ml Methanol-Wasser-Lösung (3+7) hinzu, vortexen Sie 3 Minuten lang und beschallen Sie 20 Minuten lang. Geben Sie dann Methanol-Wasser-Lösung (3+7) hinzu, um das Gesamtvolumen auf 40 ml zu bringen. Zentrifugieren Sie bei 6000 U/min für 3 Minuten, filtrieren Sie den Überstand und entnehmen Sie das Filtrat zur Reinigung. Aktivieren Sie die Festphasenextraktions-(SPE)-Säule nacheinander mit 5 ml Methanol und 5 ml Wasser. Überführen Sie die zu reinigende Lösung in die aktivierte SPE-Säule. Spülen Sie die Säule nacheinander mit 5 ml Wasser und 5 ml Methanol-Wasser-Lösung (3+7), dann eluieren Sie mit 6 ml Methanol. Sammeln Sie das Eluat, verdünnen Sie es mit Wasser auf 10 ml, filtrieren Sie es durch eine Membran und injizieren Sie es zur Analyse in den Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographen.

3. Experimentelles Ergebnis

3.1 Systemeignungsprüfung

Abb. 1 Chromatogramm der Standard-Arbeitslösung für Parabenverbindungen

Tabelle 3 Testergebnis der Standard-Arbeitslösung für Parabenverbindungen

Der Systemeignungstest zeigt, dass jeder chromatographische Peak eine gute Form, hohe theoretische Plattenzahlen, keine Störungen durch umgebende Verunreinigungspitzen und Auflösungswerte von alle größer als 1,5 aufweist, was den experimentellen Anforderungen entspricht.

3.2 Wiederholbarkeitstest

Abb. 2 Wiederholbarkeitstest-Chromatogramm von 1,0 mg/L Parabenverbindung (6 Injektionen)

Tabelle 4 Wiederholbarkeitstest-Ergebnis von 1,0 mg/L Parabenverbindung (6 Injektionen)

Der Wiederholbarkeitstest zeigte, dass nach sechs aufeinanderfolgenden Injektionen der 1,0 mg/L Parabenverbindungs-Standard-Arbeitslösung die Wiederholbarkeit der Retentionszeit unter 0,2 % und die Wiederholbarkeit der Peakfläche unter 1,0 % lag, was auf eine gute Wiederholbarkeit hindeutet.

3.3 Linearitätstest

Abb. 3 Chromatogramm des Standardkurventests

Der Linearitätstest zeigt, dass im Bereich von 0,2–50 mg/L die gemischten Standardkurven für die sieben Parabenverbindungen alle lineare Korrelationskoeffizienten von mehr als 0,9999 aufweisen, was auf eine ausgezeichnete Linearität hindeutet.

3.4 Genauigkeitstest

Abb. 4 Genauigkeitstest-Chromatogramm

Tabelle 5 Genauigkeitstest-Ergebnisse von Parabenverbindungen

Der Genauigkeitstest zeigte, dass die Wiederfindungen der sieben Parabenverbindungen in den zugesetzten Proben zwischen 97,6 % und 104,8 % lagen, was auf eine gute Genauigkeit hindeutet.

3.5 Test eines Getränks der Marke A

Abb. 5 Chromatogramm des Tests eines Getränks der Marke A

Die Probenuntersuchung ergab, dass die sieben Parabenverbindungen in dem Getränk einer bestimmten Marke nicht nachgewiesen wurden.

4. Schlussfolgerung

Dieses Experiment bezieht sich auf den "GB 5009.31-2025 Nationaler Lebensmittelsicherheitsstandard — Bestimmung von Parabenen in Lebensmitteln" unter Verwendung des Hochleistungs-Flüssigkeitschromatographiesystems der Wayeal LC3500-Serie, ausgestattet mit einem DAD-Detektor zur Analyse. Die experimentellen Ergebnisse zeigen, dass im Systemeignungstest jeder Verbindungsgipfel eine gute Form und hohe theoretische Plattenzahlen aufweist, was den experimentellen Anforderungen entspricht. Sechs aufeinanderfolgende Injektionen der 1,0 mg/L Paraben-Standard-Arbeitslösung zeigten eine Wiederholbarkeit der Retentionszeit unter 0,2 % und eine Wiederholbarkeit der Peakfläche unter 1,0 %, was auf eine gute Wiederholbarkeit hindeutet. Im Bereich von 0,2–50 mg/L überschreiten die linearen Korrelationskoeffizienten alle 0,9999, was auf eine gute Linearität hindeutet. Die Wiederfindungen der sieben Parabenverbindungen in den zugesetzten Proben lagen zwischen 97,6 % und 104,8 %, was auf eine gute Genauigkeit hindeutet. Die Wiederfindungen der sieben Parabenverbindungen in den zugesetzten Proben lagen zwischen 97,6 % und 104,8 %, was eine gute Genauigkeit belegt. Die sieben Parabenverbindungen wurden in den Probenuntersuchungen nicht nachgewiesen. Alle oben genannten Daten erfüllen die Anforderungen für das im Standardverfahren angegebene Instrument.