Bestimmung von Uridin-5'-monophosphat in Ernährungsanreicherungen für Lebensmittel mittels Hochleistungsflüssigkeitschromatographie

Als Nukleotid ist Uridin-5'-monophosphat (UMP) ein zentrales Zwischenprodukt im Nukleinsäurestoffwechsel in lebenden Organismen. Es ist das am häufigsten vorkommende Nukleotid in Säugetiermilch, und der diätetische Bedarf an Uridylat ist während des Wachstums und der Entwicklung von Nachkommen deutlich höher als bei anderen Nukleotiden. In den letzten Jahren hat die Forschung gezeigt, dass UMP nicht nur am Energiestoffwechsel und der RNA-Synthese beteiligt ist, sondern auch die Darmbarrierefunktion durch die Modulation zellulärer Signalwege verbessert. Darüber hinaus wirkt es synergistisch mit fettlöslichen Vitaminen, um die Nährstoffaufnahme und die Immunfunktion zu fördern. UMP wird häufig als Nährstoffanreicherungsmittel zu Säuglingsnahrung und Tierfutter/Geflügelfutter hinzugefügt, wobei seine Reinheit und Konzentration den Nährwert und die Sicherheit des Endprodukts direkt beeinflussen.

Schlüsselwörter:Nahrungsergänzungsmittel, UMP, Nukleotide, Hochleistungsflüssigkeitschromatographie.

1. Geräte und Reagenzien

1.1 Konfigurationsliste der HPLC

Tabelle 1 Konfigurationsliste der HPLC

1.2 Reagenzien und Standards

Tabelle 2 Reagenzien- und Standardliste

1.3 Experimentelles Material und Hilfsausrüstung

Ultraschallreiniger

Vortex-Mischer

2. Experimentelle Methode und Bedingungen

Chromatographiesäule: Nova Element AQC18, 5μm 4,6x250mm.

3. Experimentelles Ergebnis

3.1 System Eignungstest

Der System Eignungstest zeigte, dass der Zielpeak gut geformt war, mit einer hohen theoretischen Bodenzahl und ohne störende Peaks in seiner Nähe, wodurch alle experimentellen Anforderungen erfüllt wurden.

Abb. 1 Chromatogramm der Uridin-5'-Monophosphat-Standard-Arbeitslösung

Tabelle 3 Testergebnisse für die Uridin-5'-Monophosphat-Standard-Arbeitslösung

3.2 Wiederholbarkeitstest

Die Standard-Arbeitslösung von Uridin-5'-Monophosphat (UMP) wurde sechsmal injiziert. Die relative Standardabweichung (RSD) der Retentionszeit betrug 0,085 % und die der Peakfläche 0,191 %. Beide Werte lagen unter dem angegebenen Grenzwert von 2,0 %, was die Einhaltung der experimentellen Anforderungen belegt.

Abb. 2 Chromatogramme des Uridin-5'-Monophosphat (UMP) Wiederholbarkeitstests

Tabelle 4 Wiederholbarkeitstestergebnisse für Uridin-5'-Monophosphat (UMP)

3.3 Probentest

Die Peakfläche der 5'-Uridinmonophosphat-Standard-Arbeitslösung (20 mg/L) betrug 322,525, während die der Testprobenlösung 274,211 betrug. Basierend auf der externen Standardmethode wurde der UMP-Gehalt in der Probe auf 17 mg/L bestimmt.

Abb. 3 Chromatogramm der Testprobe

Tabelle 5 Probentestergebnisse

3.4 System Eignungstest für verwandte Substanzen

Der Test der System Eignungslösung für verwandte Substanzen zeigte, dass alle Verbindungspitzen gut geformt waren, mit hohen theoretischen Bodenzahlen und einer Auflösung von mehr als 2,0, wodurch die experimentellen Anforderungen erfüllt wurden.

Abb. 4 Chromatogramm der 5'-Uridinmonophosphat (UMP) Standard-Arbeitslösung

Tabelle 6 Testergebnisse für die 5'-Uridinmonophosphat (UMP) Standard-Arbeitslösung

3.5 Probenreproduzierbarkeitstest

Nach sechs aufeinanderfolgenden Injektionen der System Eignungslösung betrug die Retentionszeitwiederholbarkeit für 5'-UMP, Uracil und Uridin 0,031 %, 0,058 % bzw. 0,102 %, während die Peakflächenwiederholbarkeit 0,243 %, 0,134 % bzw. 0,134 % betrug, was den experimentellen Anforderungen entsprach.

Abb. 5 Chromatogramm des Probenreproduzierbarkeitstests

Tabelle 7 Testergebnisse für die Retentionszeitwiederholbarkeit verwandter Substanzen

Tabelle 8 Testergebnisse für die Peakflächenwiederholbarkeit verwandter Substanzen

3.6 Empfindlichkeitstest für verwandte Substanzen

Das Signal-Rausch-Verhältnis des 5'-UMP-Hauptpeaks in der Empfindlichkeitstestlösung für verwandte Substanzen ist deutlich größer als 3, was den experimentellen Anforderungen entspricht.

Abb. 6 Chromatogramm der Empfindlichkeitstestlösung für verwandte Substanzen

Tabelle 9 Testergebnisse der Empfindlichkeitslösung für verwandte Substanzen

3.7 Testen von verwandten Substanzen Referenz- und Probenlösungen

Die Peakfläche der Referenzlösung (17 mg/L) betrug 275,856. Die Gesamtpeakfläche der Verunreinigungen in der Testlösung, ohne 5'-Uridinmonophosphat, betrug 38,021. Berechnung nach der externen Standardmethode beträgt der Verunreinigungsgehalt in der Probe 2,343 mg/L.

Abb. 7 Chromatogramm des Tests der Referenzlösung für verwandte Substanzen

Tabelle 10 Testergebnisse der Referenzlösung für verwandte Substanzen

Abb. 8 Chromatogramm des Tests der Probenlösung für verwandte Substanzen

Tabelle 11 Testergebnisse für die Probenlösung für verwandte Substanzen

4. Schlussfolgerung

In diesem Experiment wurde unter Bezugnahme auf "GB 1903.69-2024 Nationaler Lebensmittelsicherheitsstandard: Lebensmittel-Nährstoffverstärker 5'-Uridinmonophosphat" die Analyse mit einem Wayeal LC3200 Hochleistungsflüssigkeitschromatographiesystem durchgeführt, das mit einem UV-Detektor ausgestattet war. Die experimentellen Ergebnisse zeigen, dass der System Eignungstest gute Peakformen für alle Verbindungen, hohe theoretische Bodenzahlen und eine Auflösung von über 2,0 zeigte, was den experimentellen Anforderungen entsprach. Die Retentionszeitwiederholbarkeit für die 5'-Uridinmonophosphat-Standard-Arbeitslösung und verwandte Substanzen lag unter 0,2 %, und die Peakflächenwiederholbarkeit lag unter 0,3 %, was auf eine gute Reproduzierbarkeit hindeutet. Die Empfindlichkeitstestlösung für verwandte Substanzen zeigte ein Signal-Rausch-Verhältnis für den 5'-Uridinmonophosphat-Hauptpeak, das deutlich größer als 3 war, was den experimentellen Anforderungen entsprach. Alle Probentestergebnisse waren normal. Die obigen Daten erfüllen die im Standardverfahren angegebenen Geräteanforderungen.