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2026-10-21
Nitroimidazole sind synthetische antibakterielle und antiprotozoale Arzneimittel, die anaerobe Bakterien und Trichomonaden wirksam hemmen.Früher wurden sie in der Viehzucht und Aquakultur zur Bekämpfung von Verdauungsinfektionen und Protozoenkrankheiten eingesetzt., die Überlebensraten verbessern. Dennoch sind die Ausgangsmedikamente und ihre Metaboliten nachweislich toxisch: Sie werden bei Tieren rasch in mehrere aktive Metaboliten umgewandelt,Einige davon bleiben im Gewebe viel länger als die Ausgangsverbindung bestehen.
Toxikologische Studien zeigen, dass Nitroimidazol-Patrioritäten und ihre Hauptmetaboliten potenziell krebserregend, mutagend und genotoxisch sind.Rückstände in tierischen Lebensmitteln gelangen durch die Nahrungskette in den menschlichen Körper, und eine langfristige Einnahme in niedrigen Dosen kann die Hämatopoiese beeinträchtigen, Chromosomen schädigen und das Risiko einer Genmutation erhöhen.und kein Rückstand in tierischen Lebensmitteln zulässig ist, wodurch eine präzise Rückstandsprüfung für die Lebensmittelsicherheit unerlässlich ist.
GB 31658.23-2022, die nationale Lebensmittelsicherheitsnorm für Nitroimidazolrückstände in tierischen Lebensmitteln durch Flüssigchromatographie und Tandemmassenspektrometrie, ist die gesetzliche Grundlage für diese Arbeit.Sie umfasst die Ausgangsmedikamente und Metaboliten bei RindernEin Prüflabor benötigte einen validierten Arbeitsprozess für Schweinefleisch, der vier Zielverbindungen - Metronidazol, Hydroxymetronidazol,Dimetridazol und Hydroxydimetridazol - einschließlich der Hydroxymetaboliten, die schwerer zu halten und zu ionisieren sind, auf Sub-ppb-Ebene, mit geringer Übertragung und stabiler Präzision über lange Injektionssequenzen.
| Artikel | Ausstattung |
|---|---|
| LC-MS/MS-System | Wanyi LCMS-TQ9200 dreifach viereckig |
| Analyse-Spalte | C18, 1,6 um, 2,1 x 100 mm |
| mobile Phase A | 00,1% Ameisensäure in Wasser |
| Bewegliche Phase B | 00,1% Ameisensäure in Acetonitril |
| Durchflussrate | 00,3 ml/min |
| Spaltentemperatur | 40 °C |
| Injektionsvolumen | 4 uL |
| Hilfsgeräte | Ultraschallbad, Wirbelmischer, Hochgeschwindigkeits-Zentrifuge, Wasserbad, Stickstoffverdampfer, Analysewaage |
2 g Probe (genau 0,05 g) werden in ein 50 ml Zentrifuge-Rohr gewogen, 10 IU 1 ug/ml gemischte interne Arbeitslösung hinzugefügt, 30 Sekunden lang in einem Wirbel gedreht und 10 Minuten stehen gelassen. 15 ml Ethylacetat hinzugefügt,Wirbel für 2 Minuten und Zentrifuge bei 10Übertragen Sie das Übernatant und wiederholen Sie die Extraktion einmal mit weiteren 15 ml Ethylacetat.Beide Extrakte kombinieren und in einem 25°C-Wasserbad verdampfen, bis sie unter Stickstoff trocken sind.
Der Rückstand wird in 5 ml Salzsäure mit 0,1 mol/l gelöst, 1 Minute lang in einem Wirbel gedreht, 5 ml n-Hexan zugesetzt, 1 Minute lang geschüttelt und 5 Minuten lang bei 5.000 U/min zentrifugiert.Die Hexan-Schicht wird entsorgt und der Entfettungsvorgang mit weiteren 5 ml Hexan einmal wiederholt.. Eine Extraktionspatrone in fester Phase mit 3 ml 0,1 mol/l Salzsäure und 3 ml Methanol abfüllen, die wässrige Schicht beladen, mit 3 ml 0 waschen.1 mol/l Salzsäure und Elution mit 4 ml MethanolDas Eluat wird bei 35°C unter Stickstoff verdunstet, in 0,5 ml Wasser rekonstituiert, 1 Minute lang in einem Wirbel geschüttet und vor der Injektion gefiltert.
| Parameter | Ergebnis |
|---|---|
| Laufzeit | Vier Analyten plus interne Standards innerhalb von 8 Minuten getrennt, symmetrische Spitzen, starke Reaktion |
| Linearität | Matrixgleiche Kalibrierung bei 2, 4, 20, 40, 200 und 400 ug/L; R2 über 0,9995 für alle vier Verbindungen, Abweichung unter 20% |
| LOD und LOQ | Signal-Rausch-Gehalt von mehr als 3 bei 0,5 ug/kg und mehr als 10 bei 1 ug/kg, die den Anforderungen von 0,5 ug/kg LOD und 1 ug/kg LOQ entsprechen |
| Genauigkeit (n = 6) | RSD unter 6% bei 2 ng/mL und unter 3% bei 20 ng/mL, gegenüber einer Grenze von 10% |
| Übertragung | Leere Injektion nach 400 ng/mL Höchststandard weit unter 20% des LOQ-Peakbereichs |
| Spike-Wiederherstellung | 610,8% bis 103,35% bei 2 ng/mL und 104,35% bis 107,15% bei 20 ng/mL, innerhalb der Anforderungen von 60% bis 120% |
| Echte Schweinefleischprobe | Keines der vier Nitroimidazole wurde nachgewiesen |
Die matrixübergreifende Kalibrierung im Schweinefleisch-Extrakt kompensiert die Ionenunterdrückung aus der Fleischmatrix und hält die Quantifizierung zuverlässig auf Spurenebene.zur Bestätigung, dass die Extraktion von Ethylacetat, Hexanentfettung und SPE-Reinigung entfernen Störungen bei 1 ug/kg.
Das Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS-System lieferte eine validierte Methode für vier Nitroimidazolrückstände in Schweinefleisch gemäß GB 31658.23-2022. Symmetrische Spitzen, R2 über 0.9995, Präzision innerhalb von 10%;Vernachlässigbare Übertragung und Rückgewinnung innerhalb von 60 bis 120% zeigen, dass der Arbeitsablauf den routinemäßigen qualitativen und quantitativen Anforderungen für das Screening und die Bestätigung verbotener Tierarzneimittel entspricht, und bietet eine zuverlässige technische Grundlage für die Überwachung von Lebensmittelsicherheitsrisiken.
- Durch die Erfassung von dreifach viereckigen MRM wird die für die Bestätigung verbotener Rückstände bei 0,5 μg/kg in einer Fettfleischmatrix erforderliche Selektivität erreicht.
- Sub-2 um C18 Chemie auf einer 2,1-mm-Säule bei 0,3 ml/min löst vier Analyten in weniger als 8 Minuten mit geringem Lösungsmittelverbrauch auf.
- Isotopenmarkierte interne Normen korrigieren die Rückgewinnungsverluste während der Extraktion und SPE und stabilisieren die Ergebnisse über die Chargen hinweg.
- Das Hexanentfüttern vor SPE schützt die Patrone und die Analyse-Säule und verlängert die Lebensdauer in Laborräumen mit hohem Durchsatz.
